白癜风患者病变皮肤的石蜡包埋组织,26例白癜风患者均为2007年6月~2010年12月到门诊就诊的白癜风患者,其中男10例,女16例,年龄15~60岁,平均30±12岁,进展期12例,稳定期14例,包括局限型白癜风10例,散发白癜风的危害型白癜风6例,泛发型白癜风8例,节段型和肢端型各1例。健康对照者13例,其中男6人,女7人,年龄17~55岁,平均32.3±10.5岁,均为志愿者。
检测方法:首先把石蜡切多片7μm厚标本于干净玻片上,经过脱蜡处理蒸馏水洗后,和适量蒸馏水一起置于1.5mL血样容器中,保存于-25℃冰箱中。送广西医科大学附属白癜风医院检验科做实时定量荧光CR检测。在送检的分泌物标本中加入1mL的生理盐水,充分振荡混匀2分钟。
倒入1.5mL的离心管中,15000转离心3分钟(如有红细胞,其上清液吸干加入等量的蒸馏水,充分混匀后做同样的离心。直到红细胞充分溶解为止)将上清液吸干,加入50μlDNA提取液,充分混匀。
将混匀好的离心管放入沸水浴中煮10分钟,后取出15000转离心5分钟。取上清液5μL加入CR反应管中进行扩增。循环条件,93℃2min,1个循环,93℃60s,55℃45s,10个循环,93℃45s,55℃30s,30个循环。在DA7600荧光CR仪上进行反应。试剂、DNA提取液,反应管都由提供,每次试验按试剂盒提供的定量阳性标准品做标准曲线,同时设置阴性、空白对照。反应结束后,由电脑自动分析计算定量结果。
白癜风患者病变皮肤的石蜡包埋组织,26例白癜风患者均为2007年6月~2010年12月到门诊就诊的白癜风患者,其中男10例,女16例,年龄15~60岁,平均30±12岁,进展期12例,稳定期14例,包括局限型白癜风10例,散发型白癜风6例,泛发型白癜风8例,节段型和肢端型各1例。健康对照者13例,其中男6人,女7人,年龄17~55岁,平均32.3±10.5岁,均为志愿者。
检测方法:首先把石蜡切多片7μm厚标本于干净玻片上,经过脱蜡处理蒸馏水洗后,和适量蒸馏水一起置于1.5mL血样容器中,保存于-25℃冰箱中。送广西医科大学附属白癜风医院检验科做实时定量荧光CR检测。在送检的分泌物标本中加入1mL的生理盐水,充分振荡混匀2分钟。
倒入1.5mL的离心管中,15000转离心3分钟(如有红细胞,其上清液吸干加入等量的蒸馏水,充分混匀后做同样的离心。直到红细胞充分溶解为止)将上清液吸干,加入50μlDNA提取液,充分混匀。将混匀好的离心管放入沸水浴中煮10分钟,后取出15000转离心5分钟。取上清液5μL加入CR反应管中进行扩增。循环条件,93℃2min,1个循环,93℃60s,55℃45s,10个循环,93℃45s,55℃30s,30个循环。在DA7600荧光CR仪上进行反应。试剂、DNA提取液,反应管都由提供,每次试验按试剂盒提供的定量阳性标准品做标准曲线,同时设置阴性、空白对照。反应结束后,由电脑自动分析计算定量结果。