对于白癜风患者血清的严格筛选是整个实验的基础。筛选的过程中,我们选择正常人培养的黑素细胞作为抗原,要求黑素细胞有较高的纯度。对于每一批由原代培养的黑素细胞都进行严格的鉴定,包括形态学观察,多巴鉴定。
在我的实验过程中,我们对门诊的50余名初诊活动期的白癜风患者的血清作了抗黑素细胞抗体滴度及特异性的检测,从结果来看,50例白癜风患者血清中gIG抗体滴度及7例高滴度glG抗体的白癜风血清识别的分子量与国外报道大体一致。
目前仍在收集白癜风患者的血清,从细节做起,进行严格的筛选。尽量避免细胞的损伤,减少基因信息的丢失,不断由这种量的累积。以保证所构建的噬菌体抗体库的质量,为筛选得到特异性抗体打下良好的基础。
1.培养大量高纯度正常人的黑素细胞,经相差显微镜形态学观察及多巴染色鉴定后,作为白癜风血清筛选的抗原。以活细胞ELSIA法及筛选活动期50余名白癜风患者的血清,以其中7名血清中含高滴度及高特异性的抗黑素细胞抗体的患者的外周血中的B淋巴细胞为研究对象。
2.对B淋巴细胞进行固定与通透化处理,利用细胞内PCR技术扩增获得白癜风原始亲本配对的白癜风早期能治好吗自身抗体基因。并不断完善细胞内PCR过程中的细节,成功率达到8%。
3.对于获得的单链抗体的DNA与载体。HENljl项利进行体外重组为噬菌体抗体库的构建打下基础。